محققان شرکت سام فارمد رسام
مقاله ای در رابطه با تست اندوتوکسین چیست؟ آماده کرده اند تا شما عزیزان اطلاعات کامل تری را بدست آورید.
تست اندوتوکسین چیست؟
اندوتوکسین‌ها مولکول‌های آب‌گریزی هستند که بخش اعظمی از پوشش خارجی غشای باکتری‌های گرم منفی از پلی‌لیپو ساکارید تشکیل شده است. در اثر مرگ باکتری غشای خارجی آن‌ها تجزیه شده و اندوتوکسین آزاد می‌شود.
آندوتوکسین آزاد شده مسئول بروز برخی التهابات زنجیره‌ای مانند تب، القای پاسخ التهابی نارسایی در اندام، شوک عصبی و در موارد نادر منجر به مرگ می‌شود.
درواقع هدف از تست اندوتوکسین تعیین میزان کمبود آن در بدن و انجام آزمایش‌های پیشگیرانه در برابر اثرات خطرناک آن است.
برای خرید و سفارش کیت های اندوتوکسین (LAL)، خرید و سفارش کیت های سنجش اندوتوکسین لونزا (LONZA) و خرید و سفارش کیت های سنجش اندوتوکسین اندوسیف (Endosafe) لطفا کلیک کنید!
تست شناسایی اندوتوکسین
تست اندوتوکسین‌های باکتریایی (BET)
چارلز ریور ازلیمولوس آمبوسیت لیزات (LAL) برای همه سیستم‌های آزمایش اندوتوکسین باکتریایی، معرف‌ها و فناوری کارتریج اختصاصی ما استفاده می‌کند که به عنوان حساس‌ترین و قوی‌ترین سنجش موجود و حال حاضر در جهان است.
ما یک آزمایش کیفی آندوتوکسین باکتریایی را به روش ژل لخته به یک آزمایش کمی آندوتوکسین باکتریایی 15 دقیقه‌ای تبدیل کرده‌ایم که درست در طبقه تولید موجود است.
اندوتوکسین‌ها در غشای خارجی دیواره سلولی باکتری‌های گرم منفی یافت می‌شوند. آن‌ها یک پاسخ ایمنی قوی در انسان ایجاد می‌کنند (به‌عنوان‌مثال، تب، شوک سپتیک) و با فرآیندهای طبیعی استریل کردن از مواد قابل حذف نیستند.
در زمان نگارش، آزمایش اندوتوکسین یک الزام برای فرمولاسیون تزریقی بود، محدودیت‌های مربوط به محصولات مختلف در تک‌نگا‌رهای دارویی ذکر شده است.
حذف باکتری‌های گرم منفی از فرمولاسیون ترکیبات، اجزای بسته‌بندی، تجهیزات فرآیند و محیط تولید، وجود آن‌ها را در محصول نهایی به حداقل مقدار می‌رساند. هرگونه افزایش در سطح اندوتوکسین‌ها در انبار نشان می‌دهد که یا محصول استریل نیست و باکتری‌های گرم منفی موجود در حال تکثیر هستند یا بسته‌بندی در معرض خطر قرار گرفته و اجازه ورود باکتری‌های گرم منفی به انبار را داده است.
تست اندوتوکسین باکتریایی
تست اندوتوکسین به روش LAL
آزمایش اندوتوکسین LAL (Limulus amebocyte lysate) یک روش آزمایشگاهی است که برای تشخیص و اندازه‌گیری اندوتوکسین‌های باکتریایی در محصولات تزریقی یا دستگاه‌های پزشکی با قابلیت کاشت که تماس مستقیم یا غیرمستقیم با جریان خون یا مایع نخاعی دارند، استفاده می‌شود.
این آزمایش همچنین در نظارت بر سیستم‌های آب و مواد خام نیز قابل استفاده بوده تا اطمینان حاصل شود که آندوتوکسین‌ها به محصول نهایی انتقال داده نمی‌شوند.
اصول تست اندوتوکسین به روش LAL بر پایه کواگولاسیون است که در مایع برون سلولی یا همولنف خرچنگ نعل اسبی در حضور لیپوپلی ساکارید ایجاد می‌شود.
در ادامه بیشتر در مورد اصول تست اندوتوکسین به روش LAL بیشتر توضیح داده می‌شود.
تست اندوتوکسین به روش LAL
اصول روش تست تب‌زدایی به روش LAL
اولین اصل در این روش کواگولاسیون همولونف خرچنگ نعل اسبی است که در اثر انجام واکنش‌های شیمیایی مرتبط و پیوسته ایجاد شده و منجر به لخته شده خون می‌شود.
برای فعال‌سازی این نوع واکنش‌های شیمیایی ابتدا باید سرین پروتئازهای موجود در همولنف (به صورت پروآنریم هستند) فعال شده و سپس در ادامه منجر به فعال شدن کواگولاسیون شوند.
توجه به این نکته بسیار ضروری است که برای فعال شدن این سرین پروتئاز حضور مقدار بسیار کم از لیپوپلی ساکارید (LPS) باکتریایی کافی خواهد بود. نکته جالب توجه این است که میزان LPS برای فعال شدن سرین پروتئاز باکتری در حد پیکوگرم است.
در روش LAL ایجاد شدن ژل در نمونه‌های آزمایشگاهی نشان‌دهنده وجود اندوتوکسین است که درواقع به صورت عمده به دو روش کمی و کیفی انجام می‌شود.
امتیاز بارز تست تب‌زدایی به روش LAL نسبت به سایر روش‌های تست آزمایشگاهی این است که نمونه مورد آزمایش (خرچنگ اسب آبی) بدون کمترین آسیب‌دیدگی، بخشی از همولنف آن استخراج شده و نمونه مورد آزمایش (خرچنگ) به محل اصلی زندگی خود بازگردانده می‌شود؛ درحالی‌که در سایر روش‌ها نمونه بعد از انجام آزمایش تخریب و از بین می‌رود.
تست تب‌زدایی به روش LAL
چرا تست اندوتوکسین مهم است؟
اندوتوکسین یک لیپوپلی‌ساکارید است که در دیواره سلولی باکتری‌های گرم منفی یافت می‌شود و درواقع نوعی پیروژن (عامل تب‌زا) است.
اگر اندوتوکسین در داروهای تزریقی یا بر روی دستگاه‌های پزشکی قابل کاشت وجود داشته باشد و با جریان خون یا مایع نخاعی برخورد کند، می‌تواند باعث ایجاد یک اثر آبشاری از رویدادهایی شود که با تب، شوک سپتیک، نارسایی اندام‌ها و حتی در شرایط حاد منجر به مرگ احتمالی افراد شود.
به همین دلیل است که انجام آزمایش اندوتوکسین LAL از این محصولات که توسط مجموعه سازمان دارویی یا مقررات FDA نیزبه آننآن اشاره شده، لازم است اطمینان کافی از ایمن و سالم بودن محصول برای بیماران مصرف‌کننده را داشته باشد.
وجود اندوتوکسین باکتریایی در شرایط آزمایشگاهی با استفاده از LAL که از سلول‌های خونی خرچنگ نعل اسبی به دست می‌آید، تشخیص داده می‌شود.
لیزات در حضور اندوتوکسین یک لخته ژل تشکیل می‌دهد و در نتیجه یک آزمایش ساده و حساس را به همراه دارد.
برای خرید، فروش رفرنس استاندارد دارویی، کیت های اندوسیف و اندوتوکسین لطفا روی لینک کلیک کرده و سفارش خود را ثبت کنید تا کارشناسان فروش ما در کمترین زمان ممکن با شما تماس گرفته و سفارش شما را بررسی کنند.
روش‌های اولیه تست اندوتوکسین
همان‌طور که در USP <85> نشان داده شده است، سه روش اصلی برای تشخیص اندوتوکسین وجود دارد که در صنعت داروسازی و تجهیزات پزشکی استفاده می‌شود:
- روش لخته شدن ژل (روش ژل-کلات): این روش یکی از ساده‌ترین روش‌های سنتی کیفی مبتنی بر تشکیل لخته ژل در هنگام تعامل اندوتوکسین با لیمولوس آمبوسیت لیزات (LAL) است. روش ژل-کلات یکی از دقیق‌ترین و حساس‌ترین روش‌های LAL است که دارای کمترین میزان تست کاذب مثبت را نسبت به سایر روش‌ها را دارد.
- روش کدورت‌سنجی: اساس این روش مبتنی بر پایه واکنش LAL با اندوتوکسین است که از این طریق میزان آندوتوکسین اندازه‌گیری می‌شود.روش کدورت‌سنجی نوع بهبود یافته و تغییر یافته روش ژل-کلات است. اصلی‌ترین ایراد این روش دشوار بودن و امکان‌ناپذیر بودن آن برای نمونه‌هایی است که به صورت کدورت یا رنگی هستند.
- روش سینتیک/کروموژنیک: این روش اولین بار در سال 1977 شناخته شد.
در این روش با ایجاد رنگ در اثر برش یک بستر نمونه توالی آمینو اسیدی، کروموفور (p-nitroanilide) pNA آزاد شده و در آن ناحیه رنگ زرد ایجاد می‌شود. مولکول pNA طول موج خاصی را جذب کرده و در این روش با اندازه‌گیری میزان جذب نور در این طول موج را شناسایی و محاسبه کرد.
میزان نور جذب شده ارتباط مستقیم با مقدار آندوتوکسین موجود در نمونه را دارد. درواقع این روش مبتنی بر ایجاد رنگ پس از برش یک کمپلکس پپتید-کروموژن سنتزی است.
در حال حاضر سیستم‌های جدیدتری بر اساس روش‌های ذکر شده در بالا روانه بازار شده است که نتایج آزمایش آن با سرعت و دقت بسیار بالایی انجام می‌شود.
درصورتی‌که آزمایش در تگ‌نگاری جداگانه مشخص شود، از روش اول بهتر است استفاده شود.
همچنین، در فرآیند انجام تست و آزمایش نهایت دقت و مراقبت از نمونه‌ها انجام شده تا از آلودگی آن‌ها جلوگیری کنند.
جمع‌بندی
اندوتوکسین‌ها موادی از جنس پلی‌لیپو ساکارید هستند که در دیواره خارجی باکتری‌های گرم منفی یافت می‌شود. این مواد به دلیل خاصیت سمی بسیار بالا، موجب عوارضی مانند تب، علائم گوارشی حاد و حتی مرگ‌ومیر می‌شود. تست اندوتوکسین به روش LAL یکی از مهم‌ترین و ایمن‌ترین روش‌های آزمایشی تشخیص است. تست تشخیص آن به‌طورکلی به دو دسته کمی و کیفی تقسیم‌بندی می‌شود که از میان روش‌های آزمایشگاهی تست اندوتوکسین به روش کمی 3 دسته اصلی ژل-کلات، کدورت‌سنجی و کروموژنیک است که هرکدام از این روش‌ها دارای ویژگی‌ها و برتری‌هایی نسبت به هم هستند.