کاربردهای جالب کیت آندوتوکسین در آزمایشگاه ها
کاربرد کیت آندوتوکسین
اندوتوکسین یک آلاینده اصلی است که در مواد فعال بیولوژیکی یافت می‌شود.
وجود اندوتوکسین می‌تواند باعث واکنش‌های تب‌زایی در ارگانیسم‌های میزبان مانند شوک اندوتوکسین، آسیب بافتی و حتی مرگ شود.
کاربرد کیت آندوتوکسین برای تست تشخیص وجود آن، یکی از حیاتی‌ترین تست‌های کنترل کیفیت موردنیاز FDA برای همه داروها در فرمول نهایی است.
بنابراین، حذف اندوتوکسین از داروهای تزریقی انسانی و حیوانی، محصولات بیولوژیکی و وسایل پزشکی ضروری است. دو شرکت لونزا و اندوسیف از مطرح‌ترین شرکت‌های ساخت کیت تشخیصی اندوتوکسین هستند. در این مقاله در مورد کاربرد کیت آندوتوکسین بیشتر صحبت خواهیم کرد.
کیت‌های تشخیصی شرکت اندوسیف
کمی بیشتر درباره تست اندوتوکسین بدانیم
اندوتوکسین موجود در غشای خارجی همه باکتری‌های گرم منفی می‌تواند خطرات جدی برای سلامت انسان، از شوک برگشت‌ناپذیر تا مرگ را ایجاد کند؛ بنابراین، توسعه روش‌های حساس، دقیق و سریع برای تشخیص آن ضروری است.
شخیص اندوتوکسین‌ها از طریق آزمایش (LAL LimulusAmebocyte Lysate) و با کاربرد کیت اندوتوکسین، تکنیکی است که روزانه در آزمایشگاه‌های تحقیقاتی، بالاتر از همه در آزمایشگاه‌هایی که در آن‌ها روی مواد بیولوژیکی تحقیق می‌شود و به‌ویژه در آزمایشگاه‌های زیست پزشکی استفاده می‌شود.
این تکنیک همچنین در صنعت داروسازی بسیار رایج است، جایی که از آن برای بررسی اینکه داروها حاوی اندوتوکسین در فرمول نهایی خود نیستند، استفاده می‌شود و توسط اکثر داروخانه‌ها به‌عنوان تست استاندارد کنترل پیروژن تأیید شده است.
همچنین در انواع دیگر صنایعی که مستعد آلوده شدن به اندوتوکسین‌های باکتریایی هستند، استفاده می‌شود. به‌عنوان‌مثال، این آزمایش در کنترل کیفیت غذا و آب کاربرد زیادی دارد.
لیمولوس آمبوسیت لیزات (LAL) به‌عنوان حساس‌ترین و خاص‌ترین روش موجود برای تشخیص اندوتوکسین‌ها شناخته‌شده است. با بیش از 70 میلیون آزمایش اندوتوکسین که سالانه برای محصولات دارویی تزریقی و دستگاه‌های پزشکی قابل کاشت انجام می‌شود، هرگز یک شیوع تب‌زا توسط FDA به دلیل یک نتیجه منفی کاذب LAL وجود نداشته است.
کیت تشخیص اندوتوکسین اندوسیف
کاربرد کیت اندوتوکسین
با آزمایش‌های بیولوژیکی، تمام اندازه‌گیری‌های مستعد تغییرات در شرایط تحلیلی باید تا آنجا که عملی باشد، به‌طور مناسب کنترل شوند. در اینجا سنجش LAL دارای سطح نسبتاً بالایی از تنوع حتی برای یک سنجش بیولوژیکی است. این تنوع از سه منبع اصلی: معرف‌ها، محصول و روش یا ابزار دقیق ناشی می‌شود.
علاوه بر این، اگرچه کاربرد کیت سنجش اندوتوکسین از طریق تست LAL برای اندوتوکسین اختصاصی است؛ اما تنها بخش لیپید A از مولکول اندوتوکسین را که برای فعال کردن لیز در دسترس است، شناسایی می‌کند.
حتی هنگام کاربرد کیت اندوتوکسین آندوسیف و لونزا هم باید توجه داشت که بخش Lipid-A از مولکول اندوتوکسین ممکن است دانه‌هایی را تشکیل دهد که به‌طور کامل پراکنده و به‌اندازه کافی همگن نیستند که امکان اندازه‌گیری دقیق کل را فراهم کند؛ بنابراین، نمونه‌ای که اندوتوکسین را تشخیص می‌دهد ممکن است تمام اندوتوکسین موجود در نمونه را نشان ندهد؛ زیرا این بستگی به مقدار لیپید-A موجود دارد.
نمونه‌هایی که اندوتوکسین را شناسایی می‌کنند ممکن است دست‌کم گرفته شوند. علاوه بر این، نمونه‌ای که اندوتوکسین را تشخیص می‌دهد ممکن است در صورت تکرار همان سطح اندوتوکسین را نشان ندهد؛ زیرا در دسترس بودن لیپید-A ممکن است با تغییر ماهیت شیمیایی و پایداری نمونه در طول زمان تغییر کند.
همچنین باید توجه داشت که سمیت و واکنش انواع متمایز اندوتوکسین‌های محیطی بسته به فعالیت بیولوژیکی مولکول لیپید-A برای گونه‌های مختلف باکتری متفاوت است.
برخی از محصولات می‌توانند اندوتوکسین را جذب و پنهان کنند. به‌منظور شناسایی اندوتوکسین در این محصولات، اندوتوکسین باید از محیط ترجیحی خود جدا شود. ازآنجایی‌که بخش لیپیدی اندوتوکسین آب‌گریز است، مونومرهای اندوتوکسین گاهی اوقات می‌توانند به‌گونه‌ای تجمع کنند؛ به این معنی است که بخش لیپیدی از محلول آبی پنهان می‌شود. یکی از موارد کاربرد کیت اندوتوکسین لونزا در همین زمان است.
کیت تشخیص اندوتوکسین شرکت لونزا
عوامل تغییرات در تست اندوتوکسین
در زمان کاربرد کیت آندوتوکسین باید در نظر داشت که سنجش LAL دارای تنوع ذاتی 200-50٪ است (یک خطای 2 برابری در هر طرف استاندارد اندوتوکسین).
تغییرات، برای سنجش جنبشی، از شیب منحنی استاندارد اندوتوکسین ناشی می‌شود. عامل دیگری که باید در نظر گرفته شود، تکنیک تحلیلگر است که آزمایش را انجام می‌دهد. این تکنیک شامل پیپت کردن و اختلاط گردابی، به‌علاوه هرگونه خطای ممکن است که تحلیلگر انجام دهد، مانند آماده‌سازی یا اجرای رقت‌ها.
تغییرات اضافی از موارد زیر ناشی می‌شود:
- لوله‌های آزمایش
- نوک پیپت یک‌بارمصرف
- نکات میکروپیپت
برای موارد فوق، پلاستیک‌های مورداستفاده در عملکرد BET (مانند صفحات میکروتیتر، لوله‌های رقیق‌سازی پلاستیک) اغلب به‌طور خاص برای آزمایش اندوتوکسین ساخته نمی‌شوند.
- تکنیک آسپتیک
- تکنیک سنجش
- تغییر در لوله‌گذاری
- تغییرات در تهیه استانداردهای کنترلی
- تغییرات در تهیه رقت‌ها (که در صورت بروز خطا در اولین رقت سری بزرگنمایی می‌شود.)
- آلودگی متقابل
- تداخل محصول یا نمونه: دو دسته تداخل مهار و تقویت وجود دارد. مهار زمانی اتفاق می‌افتد که یک ماده با توانایی معرف LAL در واکنش با اندوتوکسین تداخل کند و باعث دست‌کم گرفتن مقدار اندوتوکسین موجود شود. افزایش تداخلی است که حساسیت را افزایش می‌دهد.
از بین این دو پدیده، مهار ازنظر ایمنی بیمار جدی‌تر است؛ زیرا می‌تواند منجر به انتشار محصولات شود؛ زیرا به نظر می‌رسد حاوی غلظت‌های اندوتوکسین کمتر از مشخصات هستند. درحالی‌که درواقع سطح اندوتوکسین بالاتر از مشخصات است. - ظروف نمونه‌برداری
- زمان و دمای نگهداری نمونه
- تنوع ابزار / ماژول LAL (ابزارهای مختلف ممکن است نتایج متفاوتی ارائه دهند.)
- وجود اندوتوکسین در محصول (جایی که مولکول‌های اندوتوکسین رفتار متفاوتی دارند یا در دسترس بودن لیپید A متفاوت است.)
- افزودن بافر برای تثبیت PH (بافرها استفاده می‌شوند سنجش LAL در محدوده pH 6.0 تا 8.0 بهترین عملکرد را داشته باشد.)، محلول‌های کمکی ممکن است عاری از اندوتوکسین نباشند.
موارد بروز خطا زمان کاربرد کیت اندوتوکسین آندوسیف یا در زمان کاربرد کیت اندوتوکسین لونزا نیز باید با دقت بررسی شوند.
تشخیص اندوتوکسین به‌صورت اتوماتیک
برای خرید، فروش رفرنس استاندارد دارویی، کیت های اندوسیف و اندوتوکسین لطفا روی لینک کلیک کرده و سفارش خود را ثبت کنید تا کارشناسان فروش ما در کمترین زمان ممکن با شما تماس گرفته و سفارش شما را بررسی کنند.
سخن پایانی
کاربرد کیت آندوتوکسین در امور آزمایشگاهی و نیز داروسازی بسیار مسئله حیاتی و مهمی برای تشخیص سموم باکتری‌های گرم منفی است. دو شرکت بزرگ و مطرح در تولید کیت‌های این تست، عبارت‌اند از شرکت لونزا و شرکت اندوسیف که کیت‌های تولیدی آن‌ها در ایران نیز قابل‌دسترسی است.
کاربرد کیت اندوتوکسین باید با علم نسبت به موارد بروز خطا و تغییرات درنتیجه خروجی همراه باشد. در غیر این صورت مواردی که درنتیجه تست تأثیرگذارند ممکن است از دید تکنسین‌های آزمایشگاهی دور بمانند.
منبع
