محققان شرکت سام فارمد رسام
مقاله ای در رابطه باچگونگی کشف کیت اندوتوکسینآماده کرده اند تا شما عزیزان اطلاعات کامل تری را بدست آورید.
بررسی:
- تاریخچه کیت اندوتوکسین
- کشف کیت اندوتوکسین LAL
در این مقاله به چگونگی کشف کیت اندوتوکسین خواهیم پرداخت. اندوتوکسین یک لیپوپلیساکارید (LPS) است که در دیواره سلولی باکتریهای گرم منفی یافت میشود.
این ماده یک پیروژن (به ترکیباتی ختم میشود که منجر به ایجاد تب میشود) معمولی بوده که حتی با ورود مقادیر بسیار ناچیز از آن به داخل جریان خون، واکنشهای بیولوژیکی شدید و خطرناکی را در سیستم ایمنی بدن ایجاد میکند.
مقاومت دمایی بالای این ترکیبات باعث شده که برای خنثیسازی آنها دمای بالای 250 درجه سانتیگراد آن هم تحت شرایط خلأ محیطی قرار گرفته و غیرفعال و عقیم شوند.
علت استفاده از کیت اندوتوکسین
انجام تست اندوتوکسین حیاتیترین آزمایش کنترل کیفیت است که توسط FDA برای همه داروها در مراحل نهایی فرموله سازی موردنیاز است.
اندوتوکسینها همیشه با انواع مختلفی از باکتریهای گرم منفی در ارتباط هستند؛ ازاینرو، واکنشهای شدیدی را در انسان و حیوان ایجاد میکنند و حتی در غلظت پایین نیز فعالیت سمی بالای خود را حفظ میکنند.
علاوه بر این، اندوتوکسینها نقش مهمی در بروز و گسترش بسیاری از بیماریهای مختلف نیز مشکوک هستند.
GenScript روش نوآورانهای را برای تشخیص کیت اندوتوکسین ابداع و توصیه میکند.
کیتهای سنجش اندوتوکسین GenScript میتواند برای انواع آزمایشهای اندوتوکسینهای نهایی آزمایشگاهی، برای داروهای تزریقی مربوطه به انسانها و حیوانات، محصولات بیولوژیکی و دستگاههای پزشکی به راحتی استفاده شود.
GenScript ToxinSensor Chromogenic LAL Endotoxin Assay Kit و ToxinSensor Gel Clot Endotoxin Assay Kit
روشهای قابل اطمینان برای تشخیص سطح اندوتوکسینها هستند.
روشهای موجود برای هر دو نوع کیت تشخیص اندوتوکسین طبق موارد توصیه شده در دستورالعمل FDA مورد تأیید قرار گرفته است.
کشف کیت اندوتوکسین
تاریخچه کشف کیت اندوتوکسین
تاریخچه کشف کیت اندوتوکسین به دلیل گستردگی و پیچیدگی در فرآیند شناخت و بررسی اثرات باکتریهای گرم منفی بسیار وسیع و طولانی بوده است. فعالیت سمی LPS برای اولین بار توسط ریچارد فردریش یوهانس فایفر کشف شد و آن را اندوتوکسین نامید.
او این ماده را جزو دسته اگزوتوکسینها (بهعنوان سمی که توسط باکتریها در محیط اطراف آزاد میشود) طبقهبندی کرده و اینگونه توصیف میکند که اندوتوکسینها موادی هستند که «درون» سلول باکتریایی بوده و فقط با تخریب دیواره سلولی باکتری آزادشده و اثر سمی بودن را زا خود نشان میدهد.
کارهای بعدی منتشر شده در این زمینه نشان داد که انتشار LPS از طریق میکروبهای گرم منفی لزوماً مستلزم تخریب دیواره سلولی باکتری نیست، بلکه LPS بهعنوان بخشی از فعالیت طبیعی فیزیولوژیکی فرار وزیکول غشایی به شکل وزیکولهای غشای خارجی باکتریایی (OMVs) ترشح میشود.
در تاریخ 18 ژانویه 1980، سازمان ثبت فدرال دستورالعملهایی را برای تعیین اندوتوکسینها با آزمایش لیمولوس آمبوسیت لیزات (LAL) پیشنهاد کرد. متعاقباً، پیشنویس دستورالعمل در سال 1983 بازنگری و مجدداً منتشر شد.
سازمان USP پنجمین دستورالعمل آزمایش اندوتوکسینهای باکتریایی را اصلاح کرد. بااینحال، برخلاف دستورالعمل پیشنویس FDA، هیچ مفاد آزمایش مجدد در آن گنجانده نشد. اکثر تولیدکنندگان در مراحلی از تأیید آزمایش کیت تشخیص اندوتوکسین باکتریایی خود به یک مفاد دقیق و جامع نرسیدهاند.
تاریخچه کیت اندوتوکسین
برای خرید، فروش رفرنس استاندارد دارویی، کیت های اندوسیف و اندوتوکسین لطفا روی لینک کلیک کرده و سفارش خود را ثبت کنید تا کارشناسان فروش ما در کمترین زمان ممکن با شما تماس گرفته و سفارش شما را بررسی کنند.
سیستم حذف اندوتوکسین
اندوتوکسینها، بهعنوان لیپوپلیساکاریدهایی (LPS) شناخته میشود که یک جزء غشای سلولی از باکتریهای گرم منفی را تشکیل میدهد.
یک سلول E. coli حاوی حدود 2 میلیون مولکول LPS است که در طی تخریب سلولی در لیزات (Lysate) آزاد میشوند.
این مواد میتوانند یک پاسخ ایمنی قوی در میزبانان پستانداران ایجاد کنند و منجر به سندرم پاسخ التهابی سیستماتیک (SIRS) و یا سپسیس شوند.
اندوتوکسینها به دلیل تنوع زیاد وزن مولکولی، اغلب از محلول خارج میشوند. علاوه بر این، اندوتوکسینها نسبتاً پایدار بوده و نسبت به تغییرات دما و pH حساسیت پایینی دارند. از نمونههای خوب باکتریهای گرم منفی تولیدکننده پیروژن میتوان به اشریشیا کلی، پروتئوس، سودوموناس، انتروباکتر و کلبسیلا اشاره کرد.
برای افزایش قدرت اتصال اندوتوکسینها میتوان از لیگاندهای با قدرت پیوند قوی استفاده نمود که بهراحتی اندوتوکسینها را به یک سیستم تبادل آنیونی وصل میکند.
سیستم حذف اندوتوکسین Toxin Eraser بر اساس ماتریسی از ترکیب پلیمیکسین B اصلاح شده (PMB) است که امکان حذف کارآمد اندوتوکسین را از نمونههایی مانند پروتئینها، پپتیدها و آنتی بادیها را فراهم میکند. با استفاده مکرر از رزین حذف اندوتوکسین Toxin Eraser، درصد نهایی اندوتوکسین را میتوان تا 0.1 EU/ml کاهش داد.
ویژگیهای کیت اندوتوکسین باکتریایی
پیروژن میکروبی در مقابل اندوتوکسین باکتریایی گرم منفی به یک اصطلاح توصیفی کلی برای بسیاری از مواد مختلف تبدیل شده است.
بااینوجود، مواد تبزا میتواند توسط برخی از باکتریهای گرم مثبت، مایکوباکتریها، قارچها و همچنین ویروسها ایجاد شوند.
پیروژنهای تولید شده توسط باکتریهای گرم منفی (اندوتوکسینها) برای صنعت داروسازی بسیار مهم و ارزشمند هستند.
دیواره خارجی باکتریهای گرم منفی از پوشش لیپوپلیساکاریدی تشکیل شده است.
این ویژگی مضر در ساختار ترکیب دیواره سلولی باکتری، برای بسیاری از موجودات زنده از جمله انسانها و حیوانات بسیار خطرناک است.
لیمولوس آمیبوسیت لیزات (LAL) بهعنوان حساسترین و مهمترین روش موجود برای تشخیص اندوتوکسین ثابت شده است.
چارلز ریور طیف وسیعی از فرمولاسیون کمی و کیفی LAL را توسعه داده و بهینه کرده است که باعث افزایش حساسیت، افزایش خطی بودن جواب تست و افزایش مقاومت درونی سیستم میشود.
توجه به این نکته بسیار ضروری است که آزمایش LAL تنها برای اندوتوکسینها معتبر بوده و برای هر از نوع پیروژن قابل استفاده نیست.
در اکثر گزارشات به این نکته اشاره شده است که بیشتر آزمایشات با استفاده از کیت تشخیص اندوتوکسین برای شناسایی سایر پیروژنها نیز استفاده میشود؛ درحالیکه اندوتوکسینهای باکتریایی از مقاومت دمایی بسیار بالایی برخوردار هستند.
از میان باکتریهای گرم منفی شناخته شده که روزانه به صورت مستقیم و غیرمستقیم با آنها مواجه هستیم، میتوان به سالمونلا و اشرشیا کلی و باکتریهای ناشناخته مانند شیگلا و نیسیرا اشاره کرد.
چه به روشهای تست سنتی علاقه داشته باشید چه به فناوری کارتریج انحصاری Endo safe، معرفها، ابزارها و نرمافزارهایی که امروزه در دسترس است بهطور کامل این اطمینان را میدهند که آزمایشهای تست اندوتوکسین باکتریایی در تمامی مراحل انجام تست، نتایج قابل اعتماد و دقیقی را ارائه خواهند داد.
ویژگیهای اندوتوکسین باکتریایی
تاریخچه کشف کیت اندوتوکسین LAL
بسیار طولانی و وسیع است؛ بهطوریکه اولین استارت آن قبل از قرن نوزدهم انجام شده است.
برای اولین بار مشاهدات علمی مربوط به انعقاد خون لیمولوس در سال 1885 به صورت علمی ثبت شد.
در سال 1953 فردریک بنگ اثرات تزریق یک باکتری دریایی به نام لیمولوس پلیفموس را روی انعقاد خون بررسی کرد. نتایج او نشان میدهد که این نوع باکتری منجر به منعقد شدن خون در عروق داخلی میشود. از طرف دیگر، این بررسی روی سایر باکتریهای گرم منفی همین نتایج را نشان داد.
برخلاف آنها باکتریهای گرم مثبت چنین اثرات مخرب را از خود نشان نمیدهند. در نهایت، نتایج بهدست آمده در این زمینه منجر به کشف کیت LAL شد.
علاقهمندی به اثرات و مکانیسم بیماری این نوع باکتری بیشتر شده و مطالعات زیادی روی آن انجام گرفت. در سال 1964 جزئیات دقیق و پیشرفته از انعقاد سلولی در لیمولوس منتشر شد. نتایج بررسیها از تأثیر عاملی بهنام اندوتوکسین بوده که منجر به لخته شدن خون میشود.
در سال 1968 مکانیسم اثر انعقادی آن بررسی شده و نتایج نشان داد که ماهیت بیماریزا بودن خود را در گرانول آمبوسیت بروز میدهد.
جیمز اف.کوپر مطالعهای را تحت هدایت جک لوین و هنری ان.واگنر برای بررسی استفاده از LAL به عنوان جایگزینی برای استفاده از آزمایش پیروژن خرگوش جهت تشخیص اندوتوکسین در داروها را آغاز کرد.
مطالعات و بررسیهای بسیار زیادی در این زمینه انجام گرفت و در نهایت در سال 2014 اولین کیتهای اندوتوکسین دوز پایین با قابلیت بازیافت و استفاده مجدد ساخته و روانه بازار شد و تا به امروز هنوز مطالعات و بررسیها روی این نوع کیتها در حال توسعه و گسترش است.
تاریخچه کشف کیت اندوتوکسین LAL
جمعبندی
در این مقاله نگاهی کلی بر تاریخچه کشف کیت اندوتوکسین و انواع آن داشتیم.
بهطورکلی بیماری لیمولوس در سال ۱۸۸۵ که به صورت انعقاد خون در دیواره سلولی است، آغاز کننده مطالعه بر روی کیتهای تشخیص این بیماری شد که بعدها و در طی دهههای طولانی نهایتاً به کشف کیت تشخیص اندوتوکسین منجر شد.
مطالعات بالینی در این زمینه تا به امروز همچنان ادامه داشته و شرکتهای داروسازی معتبر در تلاش برای کشف کیت تشخیص دقیق، سریع و ارزان قیمت هستند.