محققان شرکت سام فارمد رسام
مقاله ای در رابطه معرفی انواع روش استفاده از کیت اندوتوکسین روش LAL تا شما عزیزان اطلاعات کامل تری را بدست آورید.
محصولات زیستی برای ورود به بازار باید در آزمایشگاه‌های کنترل کیفیت، تست‌های مشخصی را بگذرانند تا ایمنی آن‌ها تأیید شود.
مخصوصاً محصولات حاصل از باکتری‌ها ممکن است تا حدی حاوی اندوتوکسین یا سم باکتریایی باشند؛ در نتیجه، باید این مواد کشنده که برای انسان بسیار سمی است در محصول نهایی وجود نداشته باشد و برای رسیدن به این هدف باید از کیت مخصوصی برای شناسایی استفاده کرد.
یکی از این روش‌ها، کیت اندوتوکسین LAL است که در ادامه به بررسی بیشتر روش استفاده از کیت اندوتوکسین روش LAL خواهیم پرداخت.
آشنایی با عملکرد و روش استفاده از کیت اندوتوکسین LAL
معرفی روش LAL
تست LAL اختصار عبارت Limulus Amebocyte Lysate است.
در این روش میزان اندوتوکسین باکتریایی در نمونه موجود بررسی می‌شود.
این روش بر اساس کواگولاسیون بین مواد موجود در کیت و اندوتوکسین باکتریایی عمل می‌کند و نتیجه حاصله به متخصصان کنترل کیفیت کمک می‌کند که کیت را وارد مراحل بعدی تولید کنند یا نه.
کواگولاسیون
به این معناست که میان اندوتوکسین باکتریایی و مواد موجود در کیت یک برهم‌کنشی شکل می‌گیرد و مواد پیچیده‌تری تولید می‌شوند.
این مواد تازه خاصیت‌های متفاوتی را دارند و بر روی خواص فیزیکی تأثیر خواهند داشت؛ در نتیجه، می‌توان میزان اندوتوکسین موجود در نمونه را بررسی کرد.
مواد این کیت از خرچنگ نعل اسبی گرفته می‌شود که از قدیمی‌ترین موجودات حاضر بر روی زمین است.
این فسیل زنده، مایع خارج از سلولی یا همولنف مخصوصی دارد که در مجاورت با اندوتوکسین باکتریایی مانند لیپوپلی‌ساکارید واکنش داده و کوآگولاسیون یا لخته رخ می‌دهد.
روش استفاده از کیت اندوتوکسین LAL و اندازه‌گیری میزان توکسین در نمونه
نحوه کارکرد کیت اندوتوکسین LAL
در همولنف خرچنگ نعل اسبی موادی وجود دارند که به نام سرین پروتئازها معروف هستند.
این آنزیم‌های پروتئازی در حقیقت پروآنزیم هستند و باید فعال شوند تا خاصیت خود را به نمایش بگذارند.
با فعال‌شدن این پروآنزیم‌ها و تبدیل‌شدن به آنزیم، می‌توانند زنجیره کواگولاسیون را فعال کرده و لخته‌سازی را در محیط ایجاد کنند.
ماده‌ای که می‌تواند این پروآنزیم‌ها را فعال کند اندوتوکسین باکتریایی یا همان لیپوپلی‌ساکارید (LPS) است.
لازم به ذکر است که این پروآنزیم‌ها میزان خیلی کم اندوتوکسین باکتریایی (در حد پیکو گرم) را می‌توانند در محیط احساس کرده و سریعاً به آن پاسخ دهند.
پس زمانی که در محیط ژل یا لخته ایجاد شد می‌توان به این نتیجه رسید که نمونه به سم باکتریایی آلوده بوده و تخلیص به‌خوبی صورت نگرفته است.
در این موارد نباید محصول را به خطوط بعدی منتقل کرد؛ چراکه میزان کم اندوتوکسین باکتری هم می‌تواند سبب شوک در بدن انسان شده و حتی مرگ را به همراه داشته باشد.
تشخیص ژله‌ای بودن در روش استفاده از کیت اندوتوکسین روش LAL به دو روش کمی و کیفی انجام می‌شود.
همچنین باید به این نکته اشاره کرد که در این روش به خرچنگ نعل اسبی ضرری وارد نمی‌شود و تنها برای فرایند تولید کیت از آن همولنف را با وسیله خاصی خارج می‌کنند.
پس از خارج‌سازی مایع میان بافتی، خرچنگ به‌سلامت به محیط اصلی خود بازمی‌گردد.
نحوه استفاده از روش LAL و بیوشیمی آن
انواع روش استفاده از کیت اندوتوکسین روش LAL
روش تشخیص اندوتوکسین در نمونه دارویی یک روش سنتی بوده و برای کمی‌سازی و مطالعه بهتر باید تغییراتی را در آن ایجاد کرد.
در زیر به سه روش اشاره شده است که مختصراً در ادامه توضیح داده خواهد شد.
برای خرید، فروش رفرنس استاندارد دارویی، کیت های اندوسیف و اندوتوکسین لطفا روی لینک کلیک کرده و سفارش خود را ثبت کنید تا کارشناسان فروش ما در کمترین زمان ممکن با شما تماس گرفته و سفارش شما را بررسی کنند.
روش ژل کلات
این روش از حساس‌ترین روش استفاده از کیت اندوتوکسین روش LAL به شمار می‌رود و در دستور سازمان غذا و داروی کشورهای آمریکا و ژاپن و چند کشور اروپایی آورده شده است. بااین‌حال، این روش زمان‌بر بوده و احتمال خطای انسانی در آن بالا است.
در این روش، نمونه را در چند سطح رقیق می‌کنند تا رقت‌های مختلفی به دست آورده شود.
هرکدام از رقت‌ها میزان مشخصی اندوتوکسین را در خود دارند و بنابراین پاسخی که به ایجاد لخته در برابر کیت LAL می‌دهد متفاوت خواهد بود.
با بررسی زمانی که لخته ایجاد می‌شود، به کمک دستورالعملی که در کیت تهیه شده است، کاربر می‌تواند میزان اندوتوکسین موجود در نمونه را پیدا کند.
این روش تغییر خاصی را در نحوه کار ارائه نکرده است و همچنین قابلیت تجاری‌سازی آن محدود است؛ چون اتوماسیون آن دشوار است.
روش‌ها و نحوه استفاده از روش LAL
روش کروموژنیک و بررسی رنگ
در این روش یک ماده رنگ‌زا یا کروموژن به محیط اضافه می‌شود. زمانی که پروآنزیم‌های همولنف خرچنگ نعل اسبی در برابر اندوتوکسین باکتریایی قرار می‌گیرند فعال می‌شوند و لخته را ایجاد می‌کنند.
در کنار این مسیر معمول، این آنزیم‌های فعال شده کروموژن را نیز تجزیه می‌کنند؛ چراکه ساختاری مشابه محل برش در مسیر ایجاد لخته دارد.
پس از برشی که صورت می‌گیرد، کروموفور موجود در کروموژن (معمولاً pNA) آزاد می‌شود.
این مولکول همانند دیگر مولکول‌های موجود در طبیعت توانایی معینی برای جذب طول موج خاصی در محیط دارد.
پس با تاباندن طول موج مخصوص می‌توان جذب نوری نمونه را توسط دستگاه‌های آزمایشگاهی خواند و دقیقاً میزان اندوتوکسین موجود در نمونه را به دست آورد.
روش کدورت سنجی
در این روش استفاده از کیت اندوتوکسین روش LAL از نوعی LAL مخصوص استفاده می‌شود که در هنگام فعال‌شدن به‌جای ایجاد لخته تولید کدورت می‌کند و همین کدورت را می‌توان توسط دستگاه‌های مربوطه خواند.
این کدورت سنجی به‌وسیله دستگاه‌های مخصوص آزمایشگاهی این امکان را به کاربر می‌دهد که میزان توکسین یا سم موجود در نمونه را اندازه‌گیری کند.
همین‌طور که از شیوه انجام این روش بر می‌آید، این روش مشابه روش ژل کلات بوده اما به دلیل داشتن قدرت محاسبه میزان کدورت، امکان کمی‌سازی نیز وجود دارد.
پس از به‌دست‌آمدن میزان اندوتوکسین، می‌توان نتیجه حاصله را با منحنی استانداردی که از قبل برای کیت به‌دست‌آمده است مقایسه کرد و کمیت ماده موجود را به دست آورد.
اندازه‌گیری اندوتوکسین از اهمیت بالایی برخوردار است؛ چراکه میزان کمی از آن در خون انسان می‌تواند سبب شوک و مرگ شود.
نتیجه‌گیری
در این متن ما با کیت تشخیصی اندوتوکسین LAL و روش استفاده از کیت اندوتوکسین روش LAL آشنا شدیم.
این کیت برای شناسایی سم‌های میکروبی موجود در نمونه اهمیت بالایی داشته و بایستی در مرحله کنترل کیفیت استفاده شود تا محصول نهایی به‌دست‌آمده از باکتری‌ها عاری از هرگونه سم باکتریایی باشد.
همان‌طور که در بالاتر نیز گفته شد، این سم می‌تواند ضررهای زیادی برای سلامت انسان داشته باشد. امیدوار هستیم که از مطالب این مقاله استفاده کرده باشید.